Caracterización de un plásmido mini-ColC1

Un plásmido construido in vitro, pVH15, que consiste en el genoma completo del plásmido ColE1, el operón de triptófano de Escherichia coli y regiones del bacteriófago PHI80pt190, dio lugar espontáneamente en E. coli a un plásmido mini-ColE1 que consiste aproximadamente en la mitad del genoma de ColE1 y un pequeño segmento de ADN de phi80pt190. Este plásmido mini-ColE1, designado pVH51, tiene un peso molecular de aproximadamente 2.1 X 10(6) y posee un único sitio de restricción EcoRI. Los análisis de heterodúplex mostraron que alrededor del 90% del plásmido pVH51 hibrida con aproximadamente el 50% del plásmido ColE1. Fenotípicamente, pVH51 no produjo colicina E1 pero confirió inmunidad a esta colicina. El número de moléculas de plásmido mini-ColE1 por célula se mantuvo en un nivel de cuatro a cinco veces más alto que el ColE1 normal. Un plásmido híbrido mini-ColE1, designado pML21 y que consiste en pVH51 y el fragmento kan del plásmido pSC105 insertado en el sitio de restricción EcoRI de mini-ColE1, se mantuvo a un número de copias más bajo que pVH51. Al igual que en el caso del ColE1 normal, tanto pVH51 como pML21 continuaron replicándose en presencia de cloranfenicol. La promoción de la transferencia conjugativa de pVH51 y pML21 por un plásmido auto-transmisible se redujo considerablemente en comparación con el ColE1 normal.