Proteína de unión a C4 humana. I. Aislamiento y caracterización

La proteína de unión a C4 (C4-bp), un nuevo componente del sistema del complemento, fue aislada de plasma humano mediante precipitación con polietilenglicol, seguida de cromatografía en intercambiadores de iones. C4-bp fue identificada en electroforesis en gel de poliacrilamida y dodecil sulfato de sodio (SDS-PAGE) por dos criterios independientes: su capacidad para unirse a C4b, y la inmunoprecipitación con un antisuerum monospecífico. La C4-bp purificada es una glicoproteína de 10.7 s. Consiste en varios subunidades unidas por enlaces disulfuro con un peso molecular de 70,000 daltones. En condiciones no reductoras, su peso molecular se ha estimado en SDS-PAGE como 540-590,000 daltones. La C4-bp se mueve como una β-globulina lenta a pH 8.6 en ausencia de cationes divalentes libres, pero cuando los tampones contienen lactato de Ca(++) , C4-bp es una gamma globulina. La C4-bp purificada se une a C4b purificada. La reacción avanza en presencia o ausencia de cationes divalentes y no es inhibida por diisopropilfluorofosfato. Los complejos C4b/C4-bp tienen coeficientes de sedimentación entre 15 y 17 s en ultracentrifugación en gradiente de sacarosa, y pueden ser identificados fácilmente por electroforesis inmunocruzada (CIE). Los complejos se mueven más rápido hacia el ánodo que cualquiera de las proteínas. La C4-bp es multivalente. La saturación se alcanza a relaciones moleculares de C4b/C4-bp de entre 4 y 5. La interacción entre C4b y C4-bp puede complicar los patrones electroforéticos de estas proteínas en suero humano normal, si el sistema de complemento se activa antes o durante la corrida. Sin embargo, en plasma EDTA, la C4 nativa y la C4-bp no forman complejos estables y pueden ser identificadas en picos separados tras la CIE.