Purificación y propiedades de una adenosina trifosfatasa del retículo sarcoplásmico

Resumen: Se ha purificado aproximadamente 6 veces una adenosina trifosfatasa del retículo sarcoplásmico mediante el uso de deoxicólico y fraccionamiento por sal. Los perfiles electroforéticos en gel indican que la preparación consiste en gran parte de un componente proteico. La purificación de proteínas y el aumento en la actividad ATPasa parecen ser proporcionales. La enzima, que es soluble gracias al detergente unido, se vuelve insoluble cuando se retira el deoxicólico. En ambos estados, soluble e insoluble, la actividad ATPasa es estable bajo condiciones de almacenamiento adecuadas. La enzima contiene fosfolípido en una cantidad comparable a la encontrada en el retículo intacto. Dado que la actividad ATPasa se inhibe por la digestión con fosfolipasa C, pero puede ser reactivada por la adición adicional de fosfolípido, se cree que el fosfolípido es esencial para la actividad. Las propiedades de la enzima purificada parecen ser las mismas que las de la enzima en el retículo sarcoplásmico. En ambos casos, la actividad ATPasa requiere Mg++ y es estimulada por Ca++. La actividad en presencia de 5 mm Mg++ se inhibe completamente con la adición de 0.1 a 0.5 mm etilenglicol bis(β-aminoetilo)-N,N'-tetraacetato, un quelante de gran especificidad por Ca++. La enzima es inhibida por el ácido mersalilo en los mismos niveles requeridos para la inhibición en el retículo sarcoplásmico. La actividad ATPasa es insensible a ouabaína u oligomicina. La enzima purificada cataliza un intercambio ATP-ADP y es fosforilada por ATP etiquetada en la posición terminal con 32P. La tasa de intercambio ATP-ADP y el nivel de fosforilación aumentan en un factor proporcional al aumento de la actividad ATPasa. La enzima purificada, depurada de deoxicólico, se une al calcio en presencia de ATP y oxalato, pero la tasa es solo un poco más del 1% de la catalizada por el retículo sarcoplásmico.