Análisis citométrico de la expresión del receptor de estrógeno en núcleos y células aisladas de tejidos de cáncer de mama

ANTECEDENTES: La expresión celular de receptores para las hormonas estrógeno y progesterona en tumores mamarios humanos tiene valor diagnóstico y pronóstico. Los ensayos de unión de ligandos han sido reemplazados por el análisis inmunohistoquímico de la expresión de receptores. Sin embargo, ambas técnicas son lentas, y en el ensayo de unión de ligandos es difícil medir la heterogeneidad de la expresión de receptores en células individuales. La citometría de flujo se ha utilizado ampliamente para monitorear la expresión de receptores celulares en tumores hematopoyéticos, pero ha tenido un valor limitado en el análisis de tumores mamarios, que son difíciles de disgregar en células individuales para análisis de flujo. Los receptores hormonales tienen una localización nuclear predominante, y es relativamente fácil aislar núcleos de tejidos archivados embebidos en parafina para el análisis citométrico de la expresión de receptores. MÉTODOS: Sección gruesas de tumores mamarios archivados embebidos en parafina fijados en formaldehído fueron digeridas con diferentes soluciones enzimáticas para el aislamiento de núcleos individuales. Se utilizaron diferentes fijadores para comparar los resultados en las tinciones subsiguientes de los núcleos para la expresión del receptor de estrógeno (ER). Se utilizó la doble tinción con yoduro de propidio y anticuerpos secundarios marcados con isotiocianato de fluoresceína para la expresión de ER para el análisis multiparamétrico de ER y contenido de ADN. RESULTADOS: La digestión de secciones de parafina con baja concentración de pepsina y detergentes fue ideal para el aislamiento de núcleos individuales. La fijación con paraformaldehído en presencia de Tritón X-100 mejoró la tinción de las células. Los núcleos aislados tuvieron una inmunoreactividad mejorada en comparación con las células completas, y se pudieron identificar subpoblaciones con diferentes reactividades en las fracciones nucleares. La doble tinción de núcleos para la expresión de ER y contenido de ADN podría permitir un análisis multiparamétrico de estos dos importantes parámetros. CONCLUSIONES: Los procedimientos descritos pueden ser utilizados para el procesamiento de tumores mamarios archivados embebidos en parafina para el monitoreo de la expresión de ER y aneuploidía. Estos dos parámetros tienen una importancia diagnóstica y pronóstica en los tumores mamarios. La citometría de flujo láser, al proporcionar análisis multiparamétrico, puede permitir la correlación de estos marcadores celulares con otros parámetros celulares y clínicos importantes.