La actividad gelatinolítica de la colagenasa de fibroblastos humanos de piel.

Se examinó la actividad gelatinolítica de la colagenasa de fibroblastos humanos de piel en colágenos desnaturalizados de los tipos I-V. Todos los sustratos desnaturalizados fueron cleaved, incluyendo los tipos IV y V, que son resistentes a la colagenasa en forma nativa. Curiosamente, la primera escisión mayor en los colágenos desnaturalizados de los tipos I-III ocurrió en un locus 3/4-1/4, resultando en productos electroforéticamente idénticos a los fragmentos TCA y TCB de la acción de la colagenasa mamífera sobre estos colágenos nativos. Sin embargo, en los sustratos desnaturalizados, siguieron múltiples escisiones proteolíticas adicionales. La propensión a la escisión en un sitio 3/4-1/4 en el colágeno desnaturalizado, donde la secuencia es el principal especificador de la acción enzimática, parecería indicar que la secuencia de aminoácidos más favorable de las cadenas gamma para la catálisis se encuentra en esta región. Se examinó la especificidad del enlace peptídico de la colagenasa de fibroblastos humanos sobre gelatina mediante la secuenciación de aminoácidos de colágeno tipo I desnaturalizado extensamente cleaved. El análisis de los residuos de aminoácidos en el terminal NH2 de los péptidos de gelatina resultantes mostró secuencias de "-H2N-Ile-Y-Gly" y "H2N-Leu-Y-Gly" solamente (donde Y indica que cualquier aminoácido puede encontrarse en esa posición), indicando que los enlaces Gly-Ile y Gly-Leu son los únicos sitios de escisión de la colagenasa en este sustrato. Mientras que las cadenas gamma1 de los colágenos desnaturalizados de los tipos I-III fueron cleaved a tasas similares, la colagenasa de fibroblastos fue una mucho mejor gamma2-gelatinasa que gamma1-gelatinasa sobre colágeno tipo 1 desnaturalizado. Esta preferencia por la escisión de gamma2(I) fue el resultado de un mayor kcat (750 frente a 230 h-1) y un Km más bajo (3.7 frente a 7.0 microM) que para gamma1(1), resultando en una selectividad general (kcat/Km) de más de 6 veces. En comparación con tales parámetros cinéticos sobre colágeno nativo, estos valores indican que la gelatinólisis es algo más lenta que la colagenólisis.