Detección directa de ARN del VIH-1 en muestras de pacientes con SIDA y ARC

El virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), anteriormente denominado virus humano T-linfotrópico (HTLVIII/LAV), es el agente etiológico del síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA). La detección directa de secuencias de ácidos nucleicos del VIH-1 en muestras de tejido o sangre de pacientes es posible solo en una pequeña fracción de los casos debido al bajo porcentaje de células infectadas (Shaw et al., 1984). Informamos una modificación del método de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) (Saiki et al., 1985), en el cual amplificamos secuencias de plantillas de ARN del VIH-1, para la identificación del VIH-1 en muestras de sangre periférica y tejido obtenidas de pacientes con SIDA y complejo relacionado con el SIDA (ARC). Este método de detección del VIH-1 es al menos seis órdenes de magnitud más sensible que los métodos estándar de detección de ácidos nucleicos y tiene aplicaciones clínicas directas. No se requiere cultivo de tejido in vitro del virus para la detección del VIH-1. Usando esta técnica, la secuencia en la región orfB del VIH-1 ha sido amplificada y detectada a partir de menos de 1 microgramo de ARN total preparado de unos pocos mililitros de muestras de sangre periférica. Esta técnica permite la detección clínica rápida y inequívoca de individuos potencialmente infectados por el VIH y puede ser utilizada para evaluar la eficacia de los fármacos anti-VIH-1. Para mejorar la eficiencia de esta técnica, hemos agregado la secuencia del promotor de la polimerasa T7 de procariotas a uno de los oligonucleótidos de iniciación. Después de varios ciclos de PCR con el oligo que contiene el promotor, una pequeña alícuota de la reacción puede ser utilizada para dirigir la transcripción mediada por la polimerasa T7 de secuencias amplificadas de manera específica y eficiente, mejorando así la sensibilidad y simplificando el trabajo del experimento.