Truncamientos y mutantes de escaneo de alanina del ciclasa adenosina tipo I

Se han sintetizado una variedad de constructos truncados de la ciclasa adenosina tipo I y tipo II en células Sf9 utilizando baculovirus recombinantes, así como varios ciclasa adenosina tipo I con mutaciones puntuales. Los truncamientos indican que los dominios C1b y C2b no conservados de la ciclasa adenosina no son necesarios para la regulación de la actividad enzimática por Gs alfa y forskolina. Las mutaciones puntuales demuestran la necesidad de ambos dominios conservados (y homólogos) de la ciclasa adenosina (C1a y C2a) y la no equivalencia de estos dominios. La vinculación de ciertos efectos de las mutaciones sobre el Km para el sustrato con alteraciones de las características de la inhibición del sitio P sugiere que el ATP y los inhibidores del sitio P pueden unirse a diferentes conformaciones del mismo sitio. Sin embargo, otras mutaciones solo afectaron la inhibición del sitio P. Aunque las mutaciones estudiadas no han permitido asignar funciones únicas a los dos dominios homólogos, han revelado fenotipos novedosos que parecen reflejar la complejidad regulatoria de las ciclasa adenosina unidas a membranas de mamíferos, incluyendo la posibilidad de oligomerización de las enzimas.