Un micrométodo automatizado y rápido para medir ácidos grasos libres en plasma/suero.

La investigación de la movilización y utilización de grasa como combustible en sujetos humanos requiere la cuantificación de ácidos grasos libres (AGL) en el plasma circulante. Los métodos en uso actualmente implican extracción y titulación tediosas, o reacciones enzimáticas con detecciones colorimétricas o fluorométricas. Se necesita una microtécnica rápida y confiable. Hemos adaptado el método enzimático manual del kit Wako NEFAC a un ensayo automatizado rápido realizado con un analizador micro-centrifugador. Este método depende de la acilación específica de CoA por AGL, seguida de oxidación y condensación para formar un aducto púrpura medible a 550 nm. El paso de acilación requiere incubación a 37 grados C durante 10 min, un paso crítico para el análisis de suero/plasma. Solo se necesitan 4 microL de plasma, y se pueden realizar 20 análisis en 20 min. La precisión (CV) del análisis de muestras está dentro del 2%. Los resultados de las muestras analizadas por esta técnica están dentro del 4% (SEM 1%) de los resultados del método manual. Así, se logran resultados precisos a un costo, tiempo y tamaño de muestra reducidos.