Método de cromatografía líquida de ultra alto rendimiento−espectrometría de masas en tándem para la cuantificación rápida y robusta de metabolitos aniónicos y aromáticos

La cuantificación de metabolitos es de relevancia crucial en biología, donde complementa técnicas ómicas más establecidas como la transcriptómica y proteómica. Aquí, presentamos un método de cromatografía líquida de ultra alto rendimiento con acoplamiento por pares de 25 minutos que fue desarrollado para una cobertura integral del metabolismo central (glicólisis, vía del fosfato de pentosa y ciclo del ácido tricarboxílico) y reacciones biosintéticas estrechamente relacionadas. Demostramos la cuantificación de 138 compuestos, incluidos ácidos carboxílicos, aminoácidos, fosfatos de azúcar, nucleótidos y aromáticos funcionalizados. Isómeros biológicamente relevantes como los fosfatos de azúcar se cuantifican individualmente combinando separación cromatográfica y fragmentación. La sensibilidad y robustez obtenidas permitieron la detección de más de la mitad de todos los compuestos probados en cada una de ocho muestras biológicas diversas de 0.5-50 mg de peso seco celular. Recomendamos este método para la cuantificación rutinaria y, sin embargo, integral de metabolitos primarios en una amplia variedad de matrices biológicas.