Reacciones del 1-metil-2-fenilindol con malondialdehído y 4-hidroxi-alquenales. Aplicaciones analíticas a un ensayo colorimétrico de peroxidación lipídica

En condiciones ácidas y a temperatura moderada, se encontró que el 1-metil-2-fenilindol reaccionaba con malondialdehído (MDA) y 4-hidroxi-alquenales para producir un cromóforo estable con una absorbancia máxima intensa a 586 nm. El uso de ácido metanosulfónico resulta en rendimientos óptimos de cromóforo producido a partir de MDA así como de 4-hidroxinoenal. Por el contrario, el uso de ácido clorhídrico resulta en un rendimiento óptimo de cromóforo producido a partir de MDA y una reacción despreciable de 4-hidroxinoenal. Aprovechando estas reacciones cromogénicas, desarrollamos un nuevo ensayo colorimétrico de peroxidación lipídica. Usando un medio basado en ácido metanosulfónico, se pueden medir MDA y 4-hidroxi-alquenales en la longitud de onda de 586 nm. Sin embargo, la presencia de inhibidores endógenos de la reacción con 4-hidroxi-alquenales es común, lo que significa que estos últimos pueden estar subestimados en algunas muestras biológicas. El ensayo realizado en un medio basado en ácido clorhídrico permite la medición específica de MDA en presencia de 4-hidroxi-alquenales. Tras la hidrólisis de las bases de Schiff en ácido clorhídrico (pH 1.5), cualquiera de los ensayos puede utilizarse para medir específicamente la cantidad total de MDA en muestras biológicas, ya que los 4-hidroxi-alquenales sufren una reacción de cicloadición irreversible bajo las condiciones de hidrólisis de ácido clorhídrico. Los dos ensayos se aplicaron a la determinación de la cantidad de MDA por sí solo y de MDA y 4-hidroxi-alquenales en un modelo in vitro de peroxidación lipídica. Esta metodología también se utilizó para aclarar patrones complejos de producción de MDA específico de tejidos en vivo, tras la hidrólisis de bases de Schiff, en roedores tratados con doxorubicina.