Reacciones de N-Metil-2-fenilindol con Malondialdehído y 4-Hidroxi-alquenales. Aspectos Mecánicos del Ensayo Colorimétrico de la Peroxidación Lipídica

Bajo condiciones ácidas específicas, tanto el malondialdehído (1, MDA) como el 4-hidroxynonenal (2, 4-HNE) reaccionan con N-metil-2-fenilindol (3) para dar el mismo cianina cromofórico 4 con una absorbancia máxima a 586 nm. Bajo tales condiciones, la reacción de 3 con 4-HNE (2) así como con alquilales produce un segundo cianina cromofórico 10 con absorbancia máxima a 505 nm. Se estudió en detalle la influencia de diferentes ácidos, hierro(III) y oxígeno en la reacción de 3 con aldehídos. En condiciones anaeróbicas, la reacción inducida por ácido de 4-HNE con 3 proporcionó tres intermediarios que intercambiaban rápidamente, 5-7. Su posterior fragmentación a 4 y hexanal en presencia de hierro(III) y oxígeno es consistente con la beta-fragmentación en tándem de un catión radical indolilo. Se identificaron 1-indoliloalquenos como intermediarios esenciales en la reacción inducida por ácido de 3 con aldehídos. Una fragmentación muy suave catalizada por hierro(III) de estos intermediarios proporcionó el correspondiente 3-formilindol 11 como el precursor directo del cromóforo de 505 nm 10. Tales reacciones fueron notoriamente influenciadas por la naturaleza del ácido. A diferencia de la rápida reacción cromogénica de 4-HNE que se observó en presencia de ácido metanosulfónico, la reacción inducida por HCl de 4-HNE con 3 no produjo el cromóforo de 586 nm. Además, el hexanal no produjo el cromóforo de 505 nm 10 al reaccionar con 3 en presencia de HCl, nuevamente en contraste con la rápida reacción cromogénica que se observó en presencia de ácido metanosulfónico. La comparación de las mezclas de reacción bajo las dos condiciones de ensayo confirmó que se formaron los mismos intermediarios. Concluimos que la naturaleza del ácido juega un papel crucial en la fragmentación oxidativa de los intermediarios en cromóforos, permitiendo el ensayo selectivo de MDA en presencia de 4-HNE, utilizando condiciones ácidas de HCl.