Mecanismo de inhibición plaquetaria por óxido nítrico: Fosforilación in vivo del receptor de tromboxano por quinasa dependiente de GMP cíclico.

El óxido nítrico (NO) es un potente vasodilatador e inhibidor de la activación plaquetaria. El NO estimula la producción de cGMP y activa la quinasa dependiente de cGMP (G quinasa), que mediante un mecanismo desconocido conduce a la inhibición de la señalización de Galphaq-fosfolipasa C-inositol 1, 4,5-trifosfato y la movilización de calcio intracelular para varios agonistas importantes, incluyendo el tromboxano A2 (TXA2). Para explorar el mecanismo de inhibición plaquetaria por NO, se estudió la activación de los receptores de TXA2 en plaquetas en presencia de cGMP. El análogo no hidrolizable 8-bromo-cGMP (8-Br-cGMP) inhibió de manera potente la activación de la GTPasa específica de TXA2 en membranas plaquetarias de manera dependiente de la concentración, lo que sugiere que la G quinasa cataliza la fosforilación de algún componente proximal de la vía de señalización del receptor-proteína G. Se encontró que concentraciones nanomolares de G quinasa catalizan la fosforilación de los receptores de TXA2 en plaquetas in vitro, pero no de Galphaq que co-purificaba con los receptores de TXA2 en estos experimentos. Utilizando métodos de inmunoafinidad, se demostró la fosforilación in vivo de los receptores de TXA2 por GMP cíclico a partir de células etiquetadas con 32P tratadas con 8-Br-cGMP. Los estudios de mapeo de péptidos de los receptores de TXA2 fosforilados in vivo demostraron que el cGMP media la fosforilación del término carboxilo del receptor de TXA2. La G quinasa también catalizó la fosforilación de péptidos correspondientes a las colas citoplasmáticas de las formas alfa y beta del receptor, pero no de un péptido de control o un péptido correspondiente al tercer bucle intracelular del receptor de TXA2. Estos datos identifican a los receptores de TXA2 como sustratos de la quinasa dependiente de cGMP y apoyan un nuevo mecanismo para la inhibición de la función celular por NO en el que la activación de G quinasa inhibe la señalización mediada por receptores acoplados a proteínas G al catalizar su fosforilación.