Un método estereoestructural para la detección de la transferencia de fosfato terminal de ATP en reacciones enzimáticas. Glutamina sintetasa.

Se describe un método de desorden de isótopos para la detección de la formación transitoria Enz:ADP:P-X a partir de 18OATP en reacciones enzimáticas acopladas a ATP. El método utiliza la simetría torsional del grupo recién formado (ver artículo) en ADP. El 18OATP marcado en el oxígeno del puente betagama se incubó con la enzima y se detectó la escisión reversible del enlace PbetaO -- Pgamma por la aparición de 18O en los oxígenos beta no puente del pool de ATP. Los experimentos con glutaminasas de cerebro de oveja y Escherichia coli muestran que la escisión de ATP de ADP unido a la enzima y P-X requiere glutamato. El intercambio catalizado por la enzima de E. coli con glutamato ocurre en ausencia de amoníaco y es parcialmente inhibido por NH4Cl agregado, como se esperaba si el intercambio está en la vía mecanística para la síntesis de glutamina. Los resultados proporcionan soporte cinético para un mecanismo de dos pasos donde la transferencia de fosforilo de ATP a glutamato precede a la reacción con amoníaco.