El 2‐metil‐2,4‐pentanediol induce la autoensambladura espontánea de la α‐hemolisina estafilocócica en una estructura porosa heptamérica

La α-hemolisina estafilocócica se expresa como una proteína monomérica soluble en agua y se ensambla en membranas para formar una estructura porosa heptamérica. La estructura porosa heptamérica de la α-hemolisina solo se puede preparar a partir del monómero in vitro en presencia de micelas de detergente desoxicólico, bicapas de fosfolípidos artificialmente construidas o glóbulos rojos. Aquí, logramos preparar cristales de la forma heptamérica de la α-hemolisina sin ningún detergente, pero con 2-metil-2,4-pentanediol (MPD), y determinamos su estructura. La estructura del poro heptamérica era similar a la reportada previamente. En la estructura, dos moléculas de MPD estaban unidas alrededor de Trp179, alrededor del cual estaban unidas las cabezas de los fosfolípidos en la estructura porosa heptamérica reportada previamente. La cromatografía de exclusión por tamaño mostró que la α-hemolisina no se ensambló espontáneamente incluso cuando se almacenó durante 1 año. El análisis de SDS-PAGE reveló que, entre los compuestos en el tampón de cristalización, el MPD podía inducir la formación de heptámeros. La concentración de MPD que inducía la oligomerización de manera más eficiente estaba entre el 10 y el 30%. Basado en estas observaciones, proponemos el MPD como un reactivo que puede facilitar la formación de poros heptámeros de la α-hemolisina sin unión a la membrana.