La proteína del punto de control del huso Bub1 es necesaria para la localización de Mad1, Mad2, Bub3 y Cenp-E en los cinetocoros, independientemente de su actividad quinasa

El punto de control del huso inhibe la transición de metafase a anafase hasta que todos los cromosomas están correctamente unidos al huso mitótico. Hemos aislado un homólogo de Xenopus del componente del punto de control del huso Bub1, e investigado su papel en el punto de control del huso en extractos de huevo de Xenopus. Los anticuerpos generados contra Bub1 reconocen una fosfoproteína de 150 kD tanto en interfase como en mitosis, pero la masa molecular se reduce a 140 tras la desfosforilación in vitro. Bub1 es esencial para el establecimiento y mantenimiento del punto de control y está localizado en los cinetocoros, similar al complejo del punto de control del huso Mad1-Mad2. Sin embargo, Bub1 difiere de Mad1-Mad2 en que Bub1 permanece en los cinetocoros que se han unido a microtúbulos; la proteína eventualmente se disocia del cinetocoro durante la anafase. La inmunodepleción de Bub1 anula el punto de control del huso y la unión de las proteínas del punto de control Mad1, Mad2, Bub3 y CENP-E al cinetocoro. Curiosamente, la reintroducción de la proteína Bub1, ya sea salvaje o deficiente en quinasa, restaura el punto de control y la localización de estas proteínas en los cinetocoros. Nuestros estudios demuestran que Bub1 desempeña un papel central en la activación de la señal del punto de control del huso desde el cinetocoro, y que su actividad quinasa no es necesaria para el punto de control del huso en extractos de huevo de Xenopus.