La regulación de ANGPT2 derivada de tumores gástricos por DARPP-32 promueve la angiogénesis

OBJETIVO: La sobreexpresión de la fosfoproteína regulada por dopamina y cAMP, Mr 32000 (DARPP-32), y su isoforma truncada (t-DARPP) están asociadas con la tumorogénesis gástrica. En este estudio, investigamos el papel de las proteínas DARPP-32 en la regulación de angiopoyetina 2 (ANGPT2) y en la promoción de la angiogénesis tumoral. DISEÑO: Se aplicaron PCR en tiempo real cuantitativa, inmunoblotting, reportero de luciferasa, inmunofluorescencia, inmunohistoquímica y ensayos de angiogénesis para investigar la regulación de la angiogénesis por las proteínas DARPP-32. RESULTADOS: La sobreexpresión de DARPP-32 aumentó significativamente los niveles de ARNm y proteína de ANGPT2 en células de cáncer gástrico. La sobreexpresión del mutante DARPP-32 T34A o de la isoforma truncada del N-terminal, t-DARPP, produjo efectos similares, descartando la regulación dependiente de T34 sobre la actividad de la fosfatasa de proteínas 1 en la regulación de ANGPT2. Las proteínas DARPP-32 indujeron una forma secretada de ANGPT2, que fue detectable en el medio, funcionalmente activa y capaz de inducir angiogénesis, medida por el ensayo de formación de tubos en células endoteliales de la vena umbilical humana. El bloqueo con anticuerpos de ANGPT2 secretada abrogó su función. Para identificar el mecanismo por el cual DARPP-32 regula ANGPT2, examinamos las actividades de NF-κB y del transductor de señales y activador de la transcripción 3 (STAT3), reguladores conocidos de la angiogénesis. Los resultados descartaron NF-κB y mostraron la inducción de la fosforilación de STAT3, activación y localización nuclear. La inhibición o el silenciamento de STAT3 atenuaron significativamente la inducción de ANGPT2 por las proteínas DARPP-32. Los modelos xenoinjertados in vivo demostraron que la sobreexpresión de DARPP-32 promueve la angiogénesis y el crecimiento tumoral. Los análisis de tejidos humanos de cáncer gástrico mostraron una fuerte correlación entre DARPP-32 y ANGPT2. CONCLUSIONES: Nuestros hallazgos novedosos establecen el papel del eje DARPP-32-STAT3 en la regulación de ANGPT2 en células cancerosas para promover la angiogénesis y la tumorogénesis.