Involucramiento de KSRP en la regulación post-transcripcional de la expresión de iNOS humana: interacción compleja de KSRP con TTP y HuR

Purificamos la proteína reguladora de empalme tipo KH (KSRP) como una proteína que interactúa con la región 3'-no traducida (3'-UTR) del ARNm de óxido nítrico inducible humano (iNOS). La inmunodepleción de KSRP mejoró la estabilidad del ARN de la 3'-UTR de iNOS en ensayos de degradación in vitro. En células DLD-1 que sobreexpresan KSRP, la expresión de iNOS inducida por citoquinas se redujo notablemente. En consonancia, la disminución de la expresión de KSRP aumenta la expresión de iNOS al estabilizar el ARNm de iNOS. Las co-inmunoprecipitaciones mostraron la interacción de KSRP con el exosoma y tristetraprolin (TTP). Para analizar el papel de la unión de KSRP a la 3'-UTR, estudiamos la expresión de iNOS en células DLD-1 que sobreexpresan un mutante no vinculante de KSRP. En estas células, la expresión de iNOS aumentó. El mapeo del sitio de unión reveló que KSRP interactúa con el elemento rico en AU más a la derecha (ARE) del ARNm de iNOS humano. Esta secuencia también es el objetivo de HuR, una proteína estabilizadora del ARNm de iNOS. Pudimos demostrar que KSRP y HuR compiten por este sitio de unión, y que la unión intracelular al ARNm de iNOS se redujo para KSRP y se incrementó para HuR después del tratamiento con citoquinas. Finalmente, parece que una interacción compleja de KSRP con TTP y HuR es esencial para la estabilización del ARNm de iNOS después de la estimulación por citoquinas.