LC‐HRMS कार्यप्रवाह के साथ एकीकृत बह енजाइम पेप्टाइड मैपिंग: एक केस स्टडी

सारांश पेप्टाइड चिकित्सात्मक दवाएँ अपनी आकर्षक चिकित्सीय गुणों के कारण दवाओं का एक महत्वपूर्ण वर्ग बनती जा रही हैं। हालाँकि, उनकी विकास प्रक्रिया संरचनात्मक जटिलता के कारण चुनौतीपूर्ण बनी हुई है, जिससे उन्नत विश्लेषणात्मक तकनीक की आवश्यकता होती है। पेप्टाइड मैपिंग एक प्रमुख विधि है जो पेप्टाइड की प्राथमिक संरचना की व्यापक पहचान के लिए महत्वपूर्ण है, और FDA और EMA इसकी उपयोगिता को संरचनात्मक "समानता" प्रदर्शित करने के लिए अनुशंसित करते हैं। इस अध्ययन में, हम एक बह एनजाइम पेप्टाइड-मैपिंग कार्यप्रवाह का वर्णन करते हैं जिसे अनुक्रम कवरेज और संरचनात्मक सत्यापन में सुधार करने के लिए डिज़ाइन किया गया है। प्रोटोकॉल complementary specificity के साथ बह एनजाइमेटिक पाचन को एकीकृत करता है, जो वैकल्पिक पेप्टाइड मैप बनाने के लिए सक्षम बनाता है। अलगाव के लिए वॉटरस XBridge Peptide BEH C18 कॉलम (300 Å, 2.5 μm, 4.6 × 150 मिमी) का उपयोग ग्रेडिएंट अलगाव कार्यक्रम के लिए किया गया। इसके अलावा, उच्च-रिज़ॉल्यूशन MS/MS डेटा प्राप्त करने के लिए LC‐HRMS (Orbitrap) का उपयोग किया गया, जिसने 95% अनुक्रम कवरेज के भीतर द्रव्यमान सटीकता के साथ सटीक पेप्टाइड टुकड़ा पहचान प्राप्त की और सही पूर्ण द्रव्यमान पुष्टि की। कुल मिलाकर, वर्णित विधि पेप्टाइड-मैपिंग-आधारित संरचनात्मक सत्यापन के लिए एक विश्वसनीय और चरणबद्ध दृष्टिकोण प्रदान करती है, जिससे एक्सेनेटाइड और H‐GLP‐1 की प्राथमिक संरचना का आत्मविश्वास से आकलन संभव होता है।