लूप-माध्यमिक समदाबित DNA अभिवर्धन

हमने एक नवीन विधि विकसित की है, जिसे लूप-माध्यमिक समदाबित अभिवर्धन (LAMP) कहा जाता है, जो समदाबित परिस्थितियों में उच्च विशिष्टता, दक्षता और तेजी के साथ DNA को अभिवर्धित करती है। इस विधि में DNA पॉलिमरेज़ और चार विशेष रूप से डिज़ाइन की गई प्राइमर्स का सेट शामिल है, जो लक्षित DNA पर छह अलग-अलग अनुक्रमों को पहचानते हैं। एक आंतरिक प्राइमर, जो लक्षित DNA के संवेदी और ऐंटी-संवेदी धागों के अनुक्रमों को含 करता है, LAMP की शुरुआत करता है। इसके बाद बाहरी प्राइमर द्वारा प्रारंभित धागा विस्थापन DNA संश्लेषण एक एकल-धागे वाला DNA जारी करता है। यह DNA संश्लेषण के लिए टेम्पलेट के रूप में कार्य करता है, जिसमें दूसरे आंतरिक और बाहरी प्राइमर शामिल होते हैं जो लक्षित के दूसरे सिरे पर हाइब्रिडाइज करते हैं, जिससे एक स्टेम-लूप DNA संरचना उत्पन्न होती है। बाद में LAMP चक्र में एक आंतरिक प्राइमर उत्पाद के लूप पर हाइब्रिडाइज करता है और विस्थापन DNA संश्लेषण शुरू करता है, जिससे मूल स्टेम-लूप DNA और एक नई स्टेम-लूप DNA उत्पन्न होती है, जिसकी स्टेम की लंबाई दो बार बढ़ जाती है। यह चक्र प्रतिक्रिया 10^9 लक्ष्यों की प्रति घंटे से कम समय में संचय के साथ जारी रहती है। अंतिम उत्पाद स्टेम-लूप DNAs होते हैं जिनमें लक्षित के कई उल्टे पुनरावृत्तियाँ और फूलगोभी जैसे संरचनाएँ होती हैं, जो उसी धागे में वैकल्पिक रूप से उल्टे पुनरावृत्तियों के बीच जुड़ने से बनती हैं। क्योंकि LAMP प्रारंभ में लक्षित को छह अलग-अलग अनुक्रमों द्वारा और बाद में चार अलग-अलग अनुक्रमों द्वारा पहचानता है, इसे उच्च चयनात्मकता के साथ लक्षित अनुक्रम को अभिवर्धित करने की अपेक्षा की जाती है।