सहमति द्वारा मार्गदर्शित म्यूटाजेनेसिस नेरीला लुसिफ़ेरस की स्थिरता और प्रकाश उत्पादन में सुधार किया है

लुसिफ़ेरसेस, जिन्हें जैविक अनुसंधान में रिपोर्टर जीन के रूप में व्यापक रूप से उपयोग किया गया है, उन अनुप्रयोगों में भी इस्तेमाल किया जा सकता है जहाँ प्रोटीन स्वयं लिगैंड्स के साथ संयोजित होता है ताकि छोटे जानवरों की इमेजिंग के लिए उपयुक्त प्रॉब बनाए जा सकें। चूंकि सामान्य रूप से प्रयुक्त लुसिफ़ेरसेस की बायोल्यूमिनसेंस गतिविधि सीरम में इतनी अस्थिर होती है कि इसे इस अनुप्रयोग की अनुमति नहीं मिलती, सहमति अनुक्रम संचालित रणनीति का उपयोग करके चुने गए विशेष म्यूटेशन के नेरीला लुसिफ़ेरस को सीरम में गतिविधियों की स्थिरता और उनके प्रकाश उत्पादन के लिए जांचा गया। इस जानकारी का उपयोग करते हुए, आठ अनुकूल म्यूटेशन को मिलाकर एक उत्परिवर्ती नेरीला लुसिफ़ेरस (RLuc8) बनाया गया, जो पैतृक एंजाइम की तुलना में मूषक सीरम में निष्क्रियता के प्रति 200 गुना अधिक प्रतिरोधी है और इसमें 4 गुना सुधारित प्रकाश उत्पादन है। उत्परिवर्तनात्मक विश्लेषण के परिणामों का उपयोग एक डबल उत्परिवर्ती उत्पन्न करने के लिए भी किया गया जिसे रिपोर्टर जीन के रूप में उपयोग के लिए अनुकूलित किया गया। डबल उत्परिवर्ती में मूल एंजाइम के मुकाबले सीरम में निष्क्रियता के प्रति आधा प्रतिरोध था, जबकि इसमें प्रकाश उत्पादन में 5 गुना सुधार हुआ। ये नेरीला लुसिफ़ेरस के विविधताएं, जो मूल एंजाइम की तुलना में महत्वपूर्ण रूप से सुधारित गुण प्रदर्शित करती हैं, मौजूदा लुसिफ़ेरस-आधारित परीक्षणों में संवेदनशीलता बढ़ाने के साथ-साथ लुसिफ़ेरस प्रोटीन से लेबल किए गए नए प्रॉब के विकास की भी अनुमति देंगी।