मेटाजीनोमिक्स-आधारित मानव मल माइक्रोबायोम मापन के लिए डीएनए निष्कर्षण और पुस्तकालय निर्माण विधियों की मान्यता और मानकीकरण

अवधारणा पृष्ठभूमि उच्च-थ्रूपुट अनुक्रमण द्वारा सूक्ष्मbial समुदाय के माप के लिए विधियों की मान्यता और मानकीकरण की आवश्यकता है ताकि मानव माइक्रोबायोम अनुसंधान और इसके औद्योगिकीकरण को समर्थन मिल सके। इस अध्ययन का उद्देश्य मानव मल के नमूनों के मेटाजीनोमिक्स-आधारित माइक्रोबायोम प्रोफाइलिंग की सटीकता और पुनरुत्पादकता में सुधार के लिए मानकों पर आधारित समाधान स्थापित करना था। परिणाम पहले चरण में, हमने परिभाषित मॉक समुदायों का उपयोग करके डीएनए निष्कर्षण और अनुक्रमण पुस्तकालय निर्माण के लिए विभिन्न प्रोटोकॉल की सिर-से-सिर तुलना की, ताकि प्रदर्शनकारी प्रोटोकॉल की पहचान की जा सके और मात्रात्मकता में अशुद्धता के स्रोतों को चिन्हित किया जा सके। दूसरे चरण में, हमने एक उद्योग-आधारित सहयोगात्मक अध्ययन के माध्यम से एकल प्रयोगशाला के भीतर माप परिणामों की विविधता (यानी, मध्यवर्ती सटीकता) और अंतर्भागीय हस्तांतरणीयता और पुनरुत्पादकता के संदर्भ में प्रदर्शनकारी प्रोटोकॉल की मान्यता की। हमने अपने अनुशंसित प्रोटोकॉल के प्रदर्शन की पुष्टि एक समुदाय-व्यापी अंतर्भागीय अध्ययन (यानी, MOSAIC मानकों की चुनौती) के संदर्भ में की। अंततः, हमने विधियों और प्रयोगशालाओं में माप की स्थिरता में सुधार के लिए सर्वोत्तम अभ्यास मार्गदर्शन प्रदान करने के लिए प्रदर्शन मैट्रिक्स को परिभाषित किया। निष्कर्ष मान्यता प्राप्त प्रोटोकॉल और इस अध्ययन में प्रदान की गई डीएनए निष्कर्षण और पुस्तकालय निर्माण के लिए विधिक मार्गदर्शन मानव मल माइक्रोबायोटा के मेटाजीनोमिक विश्लेषण के लिए वर्तमान सर्वोत्तम प्रथाओं का विस्तार करते हैं। हमारे प्रोटोकॉल और दिशानिर्देशों की अपतटीयता मानव माइक्रोबायोम के मेटाजीनोमिक्स-आधारित अध्ययनों की सटीकता और तुलना में सुधार करेगी, जिससे मानव माइक्रोबायोम-आधारित उत्पादों के विकास और वाणिज्यीकरण में सहायता मिलेगी।