चिकन इम्यून प्रतिक्रियाओं का मूल्यांकन करने के लिए अत्यधिक मल्टीप्लेक्स्ड क्वांटिटेटिव पीसीआर आधारित प्लेटफॉर्म

पक्षियों की जन्मजात और अनुकूलनीय इम्यून प्रतिक्रियाओं का विश्लेषण करने के लिए संवेदनशील उच्च-थ्रूपुट परीक्षणों की आवश्यकता को पूरा करने के लिए, हमने चिकन इम्यून-सम्बंधित जीनों के संक्रांतन का विश्लेषण करने के लिए एक अत्यधिक मल्टीप्लेक्स्ड qPCR 96.96 फ्लुइडिग्म डायनैमिक एरे विकसित और मान्यता प्राप्त की। यह माइक्रोफ्लुइडिक प्रणाली 6 नैनोलीटर प्रतिक्रियाओं में 96 नमुओं में 96 ट्रांसक्रिप्ट्स के अभिव्यक्ति का सामयिक विश्लेषण करने की अनुमति देती है और 9,216 प्रतिक्रियाएं तुरंत व्याख्या के लिए तैयार हैं। एक RNA-seq विश्लेषण से 89 जीनों का एक पैनल चुना गया था जो चिकन मैक्रोफेज, डेंड्रिटिक कोशिकाएं और हेटेरोफिल के जन्मजात प्रतिरक्षा के एगोनिस्ट के प्रति संक्रांतिक प्रतिक्रिया पर आधारित था और प्रकाशित ट्रांसक्रिप्टोम डेटा से लिया गया था। एम्प्लिकॉन अनुक्रमण और मेल्टिंग कर्व विश्लेषण द्वारा परीक्षणों की अत्यधिक विशिष्टता की पुष्टि की गई और रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन और प्रीएम्प्लीफिकेशन चरणों को अनुकूलित किया गया। एरे को दो विभिन्न स्तरों की जैव सुरक्षा में रखे गए एक वाणिज्यिक ब्रायलर चिकनों के विभिन्न ऊतकों से RNA पर लागू किया गया। आंत से जुड़ी लिम्फोइड ऊतकों, बर्सा, प्लीहा और परिधीय रक्त ल्यूकोसाइट्स को अलग किया गया और इम्यून-सम्बंधित जीनों के लिए ट्रांसक्रिप्ट स्तरों को परिभाषित किया गया। परिणामों ने रक्त कोशिकाओं को सभी परीक्षण किए गए ऊतकों में इम्यून प्रतिक्रियाओं के संभावित विश्वसनीय संकेतक के रूप में पहचाना, जिसमें विभिन्न जैव सुरक्षा स्तरों के तहत रखे गए पक्षियों के बीच सबसे अधिक संख्या में जीन महत्वपूर्ण रूप से भिन्नता से संक्रांतित थे। तीन विभिन्न रूप से संक्रांतित जीनों का पारंपरिक qPCR विश्लेषण मल्टीप्लेक्स qPCR एरे के परिणामों की पुष्टि करता है। चिकन इम्यून प्रतिक्रियाओं का मूल्यांकन करने के लिए एक अत्यधिक मल्टीप्लेक्स्ड qPCR आधारित प्लेटफॉर्म अनुकूलित और मान्यता प्राप्त किया गया है जिसमें वाणिज्यिक चिकनों के नमूने शामिल हैं। चयनात्मक प्रजनन कार्यक्रमों में अनुप्रयोगों के अलावा, एरे का उपयोग रोगाणु-विशिष्ट प्रॉब्स को शामिल करके पक्षीय इम्यून प्रणाली और रोगाणुओं के बीच जटिल अंतर्क्रिया का विश्लेषण करने, टीका प्रतिक्रियाओं को जांचने और इम्यून robustness के लिए भविष्यवाणी करने वाले उपकरण के रूप में किया जा सकता है।