एक उच्च-Throughput जीन नॉकआउट प्रक्रिया Neurospora के लिए कई ट्रांसक्रिप्शन कारकों के कार्यों को प्रकट करती है

विल्ट-प्रकार की तंतुयुक्त फफूंदी की प्रजातियों द्वारा प्रदर्शित समानांतर पुनः संयोजन की कम दर ने इस समूह के जीवों के लिए उच्च-Throughput जीन नॉकआउट प्रक्रियाओं के विकास में बाधा उत्पन्न की है। इस अध्ययन में, हम एक विधि का वर्णन करते हैं जिसके द्वारा हम खमीर पुनःसंयोजनीय क्लोनिंग, गैर-समानांश अंत-संयोग DNA मरम्मत में कमी वाली Neurospora उत्परिवर्ती प्रजातियों, कस्टम-लिखित सॉफ़्टवेयर उपकरणों और रोबोटिक्स का उपयोग करते हुए तेजी से नॉकआउट उत्परिवर्ती बना सकते हैं। हमारे दृष्टिकोण को स्पष्ट करने के लिए, हमने 103 Neurospora जीनों के व्युत्क्रमण वाले उत्परिवर्ती बनाए हैं जो ट्रांसक्रिप्शन कारकों को कोड करते हैं। विकास के दौरान उत्परिवर्तनों का चरित्र निर्धारण और दोनों अयौन और यौन विकास ने 43% नॉकआउट उत्परिवर्तियों के लिए अनुक्रमों को प्रकट किया, जिनमें से आधे से अधिक उत्परिवर्ती कई दोषों के साथ हैं। कुल मिलाकर, यह विधि, जो इस तंतुयुक्त फफूंदी में 90% की दक्षता के साथ उच्च-Throughput जीन विघटन को प्राप्त करती है, अन्य यूकैरियोटिक जीवों पर लागू होने का वादा करती है जिनकी समानांतर पुनः संयोजन की दर कम है।