एक मानव मास्ट कोशिका ल्यूकेमिया कोशिका रेखा में प्रोटो-ऑन्कोजीन c-kit के कोडिंग अनुक्रम में उत्परिवर्तन की पहचान जो c-kit उत्पाद की लिगैंड-स्वतंत्र सक्रियता का कारण बनता है।

c-kit प्रोटो-ऑन्कोजीन एक रिसेप्टर टायरोसिन किनेज कोडित करता है। c-kit लिगैंड, स्टेम सेल फैक्टर (SCF) के c-kit रिसेप्टर (c-kitR) से बंधने पर c-kitR टायरोसिन किनेज सक्रिय होता है, जिससे c-kitR का टायरोसिन पर ऑटोफॉस्फोरिलेशन होता है और c-kitR का फॉस्फेटिडिलिनोसिटोल 3-किनेज (PI3K) जैसे सब्सट्रेट्स के साथ संबंध बनता है। मानव मास्ट कोशिका ल्यूकेमिया कोशिका रेखा HMC-1 में, बिना SCF जोड़े c-kitR लगातार टायरोसिन पर फॉस्फोराइलेटेड, सक्रिय और PI3K के साथ जुड़ा पाया गया। RT-PCR विश्लेषण द्वारा HMC-1 कोशिकाओं में SCF mRNA ट्रांसक्रिप्ट की अभिव्यक्ति पता नहीं चली, जिससे संकेत मिलता है कि c-kitR का लगातार सक्रिय होना लिगैंड-स्वतंत्र था। c-kit cDNA के पूरे कोडिंग क्षेत्र का अनुक्रमण करने पर पता चला कि HMC-1 कोशिकाओं के c-kit जीन एक सामान्य, वाइल्ड-टाइप एलील और दो पॉइंट म्यूटेशन्स वाले म्यूटेंट एलील से बने हैं, जो इन्ट्रासेलुलर अमीनो एसिड प्रतिस्थापन Gly-560 के लिए Val और Val-816 के लिए Asp उत्पन्न करते हैं। इन दोनों म्यूटेशन्स के अमीनो एसिड अनुक्रम सभी माउस, रैट और मानव c-kit में पूरी तरह संरक्षित हैं। लगातार सक्रियता में इन म्यूटेशन्स की कारणात्मक भूमिका निर्धारित करने के लिए, माउस c-kit म्यूटेंट्स जिनमें Gly-559 और/या Val-814 (मानव Gly-560 और/या Val-816 के अनुरूप) शामिल हैं, साइट-डायरेक्टेड म्यूटाजेनेसिस द्वारा बनाए गए और मानव भ्रूण गुर्दा कोशिका रेखा 293T कोशिकाओं में व्यक्त किए गए। ट्रांसफेक्टेड कोशिकाओं में, c-kitR (Gly-559, Val-814) और c-kitR (Val-814) दोनों बिना SCF के टायरोसिन पर बहुतायत से फॉस्फोराइलेटेड और इम्यून कॉम्प्लेक्स किनेज प्रतिक्रिया में सक्रिय पाए गए, जबकि c-kitR (Gly-559) या वाइल्ड-टाइप c-kitR की टायरोसिन फॉस्फोरिलेशन और सक्रियता क्रमशः मामूली या कम थी। ये परिणाम बताते हैं कि मानव c-kitR में Asp-816 से Val का परिवर्तन एक सक्रियण उत्परिवर्तन हो सकता है और HMC-1 कोशिकाओं में c-kitR की लगातार सक्रियता के लिए जिम्मेदार हो सकता है।