50 से अधिक टुकड़ों के एक-चरण डीएनए असेंबली के लिए सममोलर डीएनए मिश्रण तैयार करने की विधि

संविधात्मक जैविकी के युग में, छोटे डीएनए टुकड़ों से डिज़ाइनर लंबे डीएनए को तेजी से बनाने की तकनीकों की आवश्यकता है। इसे साकार करने के लिए, हमने अभूतपूर्व संख्या में टुकड़ों के एक-चरण डीएनए असेंबली के लिए एक विधि स्थापित करने का प्रयास किया। मूल तकनीक बैसीलस सुभटिलिस में ऑर्डर्ड जीन असेंबली (OGAB) विधि है, जो B. subtilis के प्लास्मिड रूपांतरण प्रणाली का उपयोग करती है। चूंकि इस विधि को वृत्ताकार लिगेशन उत्पादों की आवश्यकता नहीं है बल्कि इसे टेंडम रिपीट लिगेशन उत्पादों की आवश्यकता है, सामग्री डीएनए की मोलार सांद्रता में विचलन की डिग्री ही एकमात्र निर्धारण तत्व है जो डीएनए असेंबली की दक्षता को प्रभावित करती है। डीएनए ब्लॉक को क्लोन करने वाले प्लास्मिड के आकार का सख्त मानकीकरण और पूर्ण प्लास्मिड की स्थिति में ब्लॉक का माप इस चरण की विश्वसनीयता को बढ़ाता है, जिसमें मोलार सांद्रताओं का परिवर्तन गुणांक 7% हो जाता है। इस विधि को OGAB विधि के साथ जोड़कर, 50 से अधिक डीएनए टुकड़ों की एक-चरण असेंबली संभव हो जाती है।