Sinorhizobium meliloti ग्लूकोसाइलट्रांसफेरस ExoM में आवश्यक एमिनो एसिड अवशेषों की पहचान

ExoM एक बीटा(1-4)-ग्लूकोसाइलट्रांसफेरस है जो Sinorhizobium meliloti से एक्सोपॉलीसैकराइड सुक्सिनोग्लाइकेन के पुनरावृत्ति इकाई के संयोजन में शामिल है। ExoM के अनुक्रम की तुलना Pfam ग्लाइको डोमेन 2 परिवार के अन्य सदस्यों, विशेष रूप से SpsA (Bacillus subtilis) से की गई, जिसका त्रि-आयामी संरचना हल हो चुकी है, के साथ की गई। ExoM के तीन संभावित महत्वपूर्ण एस्पार्टिक एसिड अवशेषों की पहचान की गई। प्रत्येक एस्प अमीनो एसिड के स्थान 44, 96, और 187 पर Ala के साथ एकल प्रतिस्थापन ने इन विट्रो में म्यूटेंट रिकॉम्बिनेंट प्रोटीन गतिविधि के नुकसान और एक इन विवो रेस्क्यू परीक्षण में सुक्सिनोग्लाइकेन उत्पादन के नुकसान का परिणाम दिया। Asp-44 या Asp-96 के बजाय Glu रखने वाले म्यूटेंट ने इन विट्रो गतिविधि नहीं दिखाई लेकिन इन विवो में सुक्सिनोग्लाइकेन उत्पादन को बहाल कर सकते हैं। हालाँकि, Asp-187 को Glu के साथ प्रतिस्थापित करने से ExoM पूरी तरह से निष्क्रिय हो गया, जो कि इन विट्रो और इन विवो दोनों परीक्षणों से निष्कर्षित किया गया। ये परिणाम दर्शाते हैं कि Asp-44, Asp-96, और Asp-187 ExoM की गतिविधि के लिए आवश्यक हैं। इसके अतिरिक्त, ये डेटा SpsA-UDP संरचना के आधार पर SpsA के प्रत्येक समान एस्पार्टिक एसिड के लिए प्रस्तावित कार्यों के साथ संगत हैं, अर्थात, Asp-44 और Asp-96 UDP सब्सट्रेट बाइंडिंग में शामिल हैं और Asp-187 ग्लूकोसाइलट्रांसफेरस प्रतिक्रिया में उत्प्रेरक आधार है।