मॉलिक्यूलर बीकन्स का उपयोग करके चार रोगजनक रेट्रोवायरस की मल्टीप्लेक्स पहचान

हम एक मल्टीप्लेक्स न्यूक्लिक एसिड परीक्षण का वर्णन करते हैं जो चार विभिन्न रोगजनक रेट्रोवायरस (HIV-1, HIV-2, और मानव T-lympotrophic वायरस प्रकार I और II) की पहचान और उनकी प्रचुरता निर्धारित करता है। रेट्रोवायरल DNA अनुक्रमों को एक ही, सील किए गए ट्यूब में समानांतर PCR परीक्षणों द्वारा बढ़ाया जाता है, और परिणामस्वरूप बने एंप्लिकॉन को चार अलग-अलग रंगों के, एंप्लिकोन-विशिष्ट मॉलिक्यूलर बीकन्स के हाइब्रिडाइजेशन द्वारा वास्तविक समय में टिका जाता है। वृद्धि के दौरान उत्पन्न फ्लोरेसेंस का रंग यह पहचानता है कि कौन से रेट्रोवायरस मौजूद हैं, और प्रत्येक रंग की तीव्रता को पृष्ठभूमि से महत्वपूर्ण रूप से ऊपर उठाने के लिए आवश्यक थर्मल चक्रों की संख्या यह सटीक माप प्रदान करती है कि नमूने में मूल रूप से कितनी प्रति रेट्रोवायरल अनुक्रम मौजूद थीं। 10 से कम रेट्रोवायरल जीनोम का पता लगाया जा सकता है। इसके अलावा, एक प्रचुर मात्रा में रेट्रोवायरस के 100,000 प्रति में 10 प्रतियों का पता लगाया जा सकता है। 96 नमूनों का एक प्लेट पर 3 घंटे में विश्लेषण किया जा सकता है, और बंद-ट्यूब प्रारूप का उपयोग क्रॉसओवर संदूषण को समाप्त करता है। पूर्व में अच्छी तरह से वर्णित नैदानिक नमूनों का उपयोग करते हुए, हम यह प्रदर्शित करते हैं कि प्रत्येक रोगजनक रेट्रोवायरस को सही ढंग से पहचाना जा सकता है और कोई झूठी सकारात्मकता नहीं होती है। यह परीक्षण दान किए गए रक्त और प्रत्यारोपण योग्य ऊतकों की तेज और विश्वसनीय स्क्रीनिंग को सक्षम करता है।