एंडोथेलियल नाइट्रिक-ऑक्साइड सिंथेज

गाय का एंडोथेलियल नाइट्रिक-ऑक्साइड सिंथेज (eNOS) जो Escherichia coli में व्यक्त किया गया है, मूल एंजाइम में पाए जाने वाले पोस्ट-ट्रांसलेशनल संशोधनों से रहित है और यह टेट्राहाइड्रोबायोप्टेरिन (BH4) से मुक्त है। BH4 की उपस्थिति में, eNOS का अवशोषण अधिकतम 400 nm पर होता है जो L-आर्जिनिन सब्सट्रेट जोड़े जाने पर 395 nm पर स्थानांतरित हो जाता है। BH4-मुक्त प्रोटीन के स्पेक्ट्रम का निम्न-स्पिन घटक BH4 के जोड़ने से कम हो जाता है बिना उच्च-स्पिन घटक में संबंधित वृद्धि के। BH4 का जोड़ना L-आर्जिनिन के अत्यधिक होने पर भी eNOS की निम्न-स्पिन जनसंख्या को कम करता है। ये परिणाम इस बात का संकेत देते हैं कि BH4 सीधे हीम वातावरण को मॉड्यूलेट करता है। BH4-मुक्त eNOS पूरी तरह से निष्क्रिय है, लेकिन BH4 (EC50 लगभग 200 nM) जोड़ने पर उत्प्रेरक गतिविधि फिर से प्राप्त होती है। L-आर्जिनिन के लिए स्पेक्ट्रोस्कोपिक रूप से निर्धारित बंधन स्थिरांक BH4 की उपस्थिति में लगभग 1.9 माइक्रोएम और अनुपस्थिति में लगभग 4.0 माइक्रोएम हैं। BH4-सप्लीमेंटेड एंजाइम की गतिविधि 90-120 नैनोमोल सिट्रुलाइन.मिन-1.एमजी-1 होती है और L-आर्जिनिन और N-हाइड्रॉक्सी-L-आर्जिनिन के लिए Km मान क्रमशः 3 और 14 माइक्रोएम होते हैं। विशेष रूप से दिलचस्प है यह खोज कि एसडीएस-पॉलीएक्रिलामाइड जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा BH4-मुक्त eNOS एक मोनॉमर-डाइमर संतुलन में मौजूद है जो BH4-रिसंस्टिट्यूटेड प्रोटीन के साथ देखे गए के बहुत समान है। BH4 जोड़ने से, डाइमर का प्रतिशत केवल लगभग 5% बढ़ता है। परिणाम स्थापित करते हैं कि BH4 हीम वातावरण को प्रभावित करता है और प्रोटीन को हीम हानि के संबंध में स्थिर करता है लेकिन डाइमर गठन के लिए आवश्यक नहीं है।