बंदरगाह हृदय टोपोनिन T की तेजी से शुद्धिकरण और विकास के दौरान चूहों के दिलों में इसके आइसोफॉर्म का स्विचिंग।

विभिन्न प्रजातियों के वयस्क दिलों से टोपोनिन T का त्वरित शुद्धिकरण विकसित किया गया है। शुद्धिकरण प्रक्रिया में उच्च नमक निकासी का 60 डिग्री सेल्सियस उपचार, अमोनियम सल्फेट विभाजन, और DEAE-सेलुलोज कालम क्रोमैटोग्राफी शामिल था। गाय के बाएं वेंट्रिकल से शुद्ध किया गया टोपोनिन T में दो आइसोफॉर्म शामिल थे, जो दोनों स्पष्ट आणविक द्रव्यमान और आइसोइलेक्ट्रिक बिंदु में भिन्न थे। दोनों आइसोफॉर्म केवल ट्रोपोमायोसिन की उपस्थिति में F-एक्टिन तंतुओं से बंधने में सक्षम थे। खरगोश की कंकाली टोपोनिन T के खिलाफ मोनोक्रोनल एंटीबॉडी JLT12 गाय के हृदय टोपोनिन T के दोनों आइसोफॉर्म के साथ पार-प्रतिक्रियाशील हो गई। गाय के दिल के विभिन्न हिस्सों (एट्रिया, दाएं और बाएं वेंट्रिकल) के बीच इन दोनों आइसोफॉर्मों की संबंधिक मात्रा में कोई पहचानने योग्य अंतर नहीं था। शुद्ध प्रोटीन का उपयोग चूहों को इम्यूनाइज़ करने के लिए एक एंटीजन के रूप में किया गया था, और उसके बाद दोनों आइसोफॉर्म्स के लिए उच्च टिटर और विशिष्टता वाली एक चूहा एंटीसीरम प्राप्त की गई। यह एंटीसीरम चिकन, खरगोश, और चूहों के हृदय टोपोनिन T के साथ भी पार-प्रतिक्रियाशील थी। इन एंटीबॉडीज का उपयोग पश्चिमी ब्लॉटिंग और इम्यूनोप्रीसीपिटेशन द्वारा चूहों में हृदय विकास की जांच के लिए किया गया। परिणामों ने स्पष्ट रूप से दिखाया कि 20-दिन के पुराने चूहों के भ्रूणों और 14-दिन के पुराने चूहों के दिलों के बीच टोपोनिन T आइसोफॉर्म का स्विच हुआ। दिन 5 के चूहों के दिलों से निकाले गए पोलि(A)+ RNA के इन विट्रो अनुवाद उत्पादों के इम्यूनोप्रीसीपिटेशन ने टोपोनिन T के दो आइसोफॉर्मों की उपस्थिति को प्रकट किया, यह सुझाव देते हुए कि इन दो आइसोफॉर्मों के लिए दो mRNAs हृदय कोशिकाओं में मौजूद थे। यह नोट करना दिलचस्प है कि हृदय पेशी की आकृति विज्ञान और कार्य में कुछ महत्वपूर्ण परिवर्तन भी इस विकास के समय में पहचाने गए हैं। टोपोनिन T आइसोफॉर्म स्विचिंग इस प्रकार हृदय विकास और कार्य के लिए एक महत्वपूर्ण मार्कर का प्रतिनिधित्व कर सकता है।