आकार-बहिष्करण क्रोमैटोग्राफी को द्रव्यमान स्पेक्ट्रोस्कोपी से जोड़कर इम्यूनोकॉन्जुगेट्स के संरचना का विश्लेषण

सारांश पुनःसंवर्धित मोनोक्लोनल एंटीबॉडी दवा उत्पाद विभिन्न रोगों के उपचार में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभा रहे हैं। एंटीबॉडी बड़े, बहु-श्रृंखला प्रोटीन होते हैं और एंटीबॉडी तैयारियाँ अक्सर कई आणविक रूपांतरों को शामिल करती हैं, जो इन्हें विषम बनाती हैं। विषमता तब और बढ़ जाती है जब कई दवा अणुओं को एक एंटीबॉडी अणु से कोवेलेंट तरीके से जोड़ा जाता है। उत्पाद की विशेषता के भाग के रूप में, एंटीबॉडी या उनके दवा संगोजन के आणविक भार मापे जाने की आवश्यकता होती है। इलेक्ट्रोस्प्रे आयनाइजेशन द्रव्यमान स्पेक्ट्रोस्कोपी (ESI-MS) पुनःसंवर्धित एंटीबॉडी और इम्यूनोकॉन्जुगेट्स के विश्लेषण के लिए उपयुक्त है। नमूना तैयारी ESI-MS विश्लेषण का एक महत्वपूर्ण तत्व है, विशेष रूप से नमूनों को हस्तक्षिप्त चार्ज प्रजातियों, जैसे कि लवण और बफर तत्वों से मुक्त करने की आवश्यकता होती है। इस पत्र में, अमिकॉन सेन्ट्रिफ्यूगल फ़िल्टर, उल्टे-चरण उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (HPLC), और आकार-बहिष्करण HPLC का नमूना डीसॉल्टिंग के लिए मूल्यांकन किया गया। आकार-बहिष्करण HPLC, जो जल-ऐसेटोनिट्राइल को मोबाइल चरण के रूप में इस्तेमाल करता है, को ESI-MS से सीधे जोड़कर सबसे अच्छा प्रदर्शन प्रदान किया गया और इम्यूनोकॉन्जुगेट्स के अध्ययन के लिए इसे अनुकूलित किया गया। परिणामों से पता चला कि कोवेलेंट तरीके से जुड़े मेयटैंसीनोइड अणु वाली एंटीबॉडीज़ ने चार्ज एन्केलोप प्रोफाइल उत्पन्न किए जो असंबंधित एंटीबॉडी से भिन्न थे। औसतन 3.6 दवा अणुओं को एक एंटीबॉडी अणु से यादृच्छिक तरीके से जोड़कर तैयार किए गए इम्यूनोकॉन्जुगेट नमूने में विभिन्न संगोजन प्रजातियों के वितरण के निर्धारण के लिए, प्रयोगात्मक परिस्थितियों को सावधानीपूर्वक चुना जाना आवश्यक था ताकि सभी प्रजातियों के चार्ज एन्केलोप्स को शामिल करने वाला सम्पूर्ण स्पेक्ट्रम अधिग्रहित किया जा सके। © 2005 जॉन वॉली एंड सन्स, लिमिटेड.