Arterivirus वैकल्पिक mRNA लीडर-बॉडी जंक्शन साइट्स का आनुवंशिक हेरफेर (Genetic Manipulation) संरचनात्मक प्रोटीन अभिव्यक्ति के कड़े नियमन को उजागर करता है

अपने संरचनात्मक प्रोटीनों को व्यक्त करने के लिए, arterivirus Equine arteritis virus (EAV) छह सबजीनोमिक (sg) RNA प्रजातियों का एक नेस्टेड सेट उत्पन्न करता है। ये RNA अणु असंतत प्रतिलेखन (discontinuous transcription) के एक तंत्र द्वारा उत्पन्न होते हैं, जिसके दौरान एक सामान्य लीडर अनुक्रम, जो जीनोमिक RNA के 5' सिरे का प्रतिनिधित्व करता है, sg RNA के बॉडी से जुड़ जाता है। mRNA के लीडर और बॉडी भागों के बीच का संबंध एक छोटे, संरक्षित अनुक्रम तत्व द्वारा बनता है जिसे प्रतिलेखन-विनियमन अनुक्रम (transcription-regulating sequence - TRS) कहा जाता है, जो लीडर के 3' सिरे के साथ-साथ प्रत्येक संरचनात्मक प्रोटीन जीन के अपस्ट्रीम में उपस्थित होता है। RNA3 के अपवाद के साथ, पहले यह माना जाता था कि प्रत्येक EAV sg RNA के लीडर और बॉडी को जोड़ने के लिए केवल एक बॉडी TRS का उपयोग किया जाता है। यहाँ हम दिखाते हैं कि दो अन्य sg RNA, RNA4 और RNA5 के संश्लेषण के लिए, वैकल्पिक लीडर-बॉडी जंक्शन साइट्स का उपयोग किया जाता है जो प्रतिलेखन गतिविधि में काफी भिन्न होती हैं। EAV संक्रामक cDNA क्लोन के साइट-निर्देशित उत्परिवर्तन (site-directed mutagenesis) द्वारा, RNA3, -4 और -5 को उत्पन्न करने के लिए उपयोग किए जाने वाले वैकल्पिक TRSs को निष्क्रिय कर दिया गया, जिसने संबंधित RNA स्तरों और संक्रामक संतति वायरस के उत्पादन को दृढ़ता से प्रभावित किया। वैकल्पिक TRSs से उत्पादित RNA की सापेक्ष मात्रा में महत्वपूर्ण अंतर था और यह वायरस म्यूटेंट्स की सापेक्ष संक्रामकता से मेल खाती थी। इसने दृढ़ता से सुझाव दिया कि इन RNA से व्यक्त होने वाले संरचनात्मक प्रोटीन वायरल जीवन चक्र के दौरान सीमित करने वाले कारक हैं और sg RNA संश्लेषण में असंतत चरण उनकी अभिव्यक्ति के नियमन के लिए महत्वपूर्ण है। EAV जीनोम के 3' सिरे की अनुमानित RNA संरचना के सैद्धांतिक विश्लेषण के आधार पर, हम प्रस्ताव करते हैं कि बॉडी TRS क्षेत्रों की स्थानीय द्वितीयक RNA संरचना EAV sg mRNA संश्लेषण में असंतत चरण के नियमन में एक महत्वपूर्ण कारक है।