Eg5 माइक्रोट्यूब्यूल मोटर की गतिशीलता और गति विज्ञान

हमने धीमी प्लस एंड निर्देशित माइक्रोट्यूब्यूल (MT) मोटर Eg5 के गतिशील गुणों की जांच की है। पुनः संयोजित प्रकट फ्यूजन प्रोटीन E437GST, जिसमें Eg5 के अवशिष्ट 12-437 ग्लूटाथियॉन S-ट्रांस्फरेज़ (GST) के N-टर्मिनस से जुड़े होते हैं, डाइमेरिक और गतिशील है, औसतन 0.063 (+/-0.01) माइक्रोमीटर(-1) की गति से MT को स्थानांतरित करता है। E437GST द्वारा ATP टर्नओवर की गतिशीलता की जांच फ्लोरोसेंट ATP एनालॉग मेथिलएंथ्रेनिलोयल-ATP (mantATP) का उपयोग करके की गई। MTs की अनुपस्थिति में, E437GST से mantADP की रिलीज धीमी होती है (50 mM NaCl में 0.006 s(-1)) और दर-सीमित होती है। MTs इस गतिशील चरण को लगभग 850 गुना तेजी से 4.94 s(-1) की अधिकतम दर तक तेज करते हैं। इन स्थितियों में, mantATP टर्नओवर की स्थिर-स्थिति दर 1.92 s(-1) थी, जो दर्शाती है कि MT-एक्टिवेटेड mantADP रिलीज मोटर के कुल चक्र समय का कम से कम 40% का खाता है और संभवतः दर-सीमित है। यह कदम Eg5 में kinesin की तुलना में लगभग 10 गुना धीमा है, जो दर्शाता है कि यह Eg5 और kinesin में भौतिक कदम उठाने की दर को सीमित करता है। विभिन्न न्यूक्लियोटाइड्स की उपस्थिति में मोटर के विघटन स्थिरांक MT पेलिटिंग परिक्षणों का उपयोग करके निर्धारित किए गए। ADP मोटर के सबसे कम बंधे हुए राज्य को स्थिर करता है, जबकि ATP, ATP गामा S, AMPPNP, और एपिरैस सभी मजबूत बंधन राज्यों की ओर एक परिवर्तन उत्पन्न करते हैं। कुल मिलाकर, डेटा दर्शाता है कि Eg5 अन्य दो अच्छी तरह से वर्णित MT मोटर्स, kinesin और गैर-कलरेट विघटनात्मक के साथ मजबूत गतिशील समानताएं प्रदर्शित करता है, यह सुझाव देते हुए कि सभी kinesin सुपरफैमिली मोटर्स एक समान बुनियादी यांत्रिक रसायन विज्ञान साझा कर सकते हैं।