लैकZ के स्वतंत्र अनुवाद सुनिश्चित करने के लिए ट्रांसक्रिप्शनल फ्यूजन बनाने के लिए बेहतर वेक्टर प्रणाली

लैकZ के ट्रांसक्रिप्शनल फ्यूजन के इन विट्रो निर्माण के लिए एक बेहतर वेक्टर प्रणाली विकसित की गई है। इसकी मुख्य विशेषता एक RNaseIII क्लेवेज साइट है जो पॉलीलिंकर क्लोनिंग साइट और प्रमोटर रहित लैकZ जीन के बीच डाली गई है। जब इन वेक्टरों का उपयोग ट्रांसक्रिप्शनल फ्यूजन बनाने के लिए किया जाता है, तो RNaseIII साइट पर हाइब्रिड mRNA का बाद का क्लेवेज लैकZ mRNA के लिए एक अपरिवर्तनीय 5' अंत उत्पन्न करता है। पहले के वेक्टरों की तुलना में, यह विशेषता लैकZ mRNA के स्वतंत्र अनुवाद को सुनिश्चित करने में मदद करती है, और इस प्रकार, उत्पादित बीटा-गैलाक्टोसिडेज का स्तर उपरोक्त DNA अनुक्रमों के ट्रांसक्रिप्शन की आवृत्ति को सही ढंग से दर्शाना चाहिए। वेक्टरों के अतिरिक्त संशोधनों में क्लोनिंग साइट और लैकZ के बीच एक कमजोर ट्रांसक्रिप्शनल टर्मिनेटर को हटाना, लैक के नीचे एक टर्मिनेटर डालना, और फ्यूजन के इन विट्रो निर्माण को सुगम बनाने के लिए प्रतिबंधित एंडोन्यूक्लियास क्लेवेज साइट्स को बदलना शामिल है। मल्टीकॉपी प्लास्मिड (pTL61T) और सिंगल-कॉपी लम्ब्डा (लम्ब्डा TL61) वेक्टरों का असेंबल किया गया है। ये वेक्टर सामान्यतः ट्रांसक्रिप्शनल रेगुलेटरी सिग्नल के लिए स्कैन करने में उपयोगी होंगे।