धान में DNA डीमेथिलेशन के लिए ROS1a का नल उत्परिवर्तन परिजनों में प्रेषित नहीं होता

पौधों में DNA मेथिलेशन और डीमेथिलेशन को बढ़ावा देने वाले जीन मुख्य रूप से अरबीदोउप्सिस में वर्णित किए गए हैं। अरबीदोउप्सिस DNA डीमेथिलेशन द्वि-कारक DNA एंजाइमों द्वारा मध्यस्थता की जाती है जिसमें ग्लाइकोसिलेज़ गतिविधि होती है जो 5-मिथाईलसाइटोसिन को हटाती है और लाइज़ गतिविधि होती है जो एक एबेसिक साइट पर दोहरी-स्ट्रैंडेड DNA को निक करती है। चावल जीनोम में छह संभावित DNA डीमेथिलेस जीनों में सबसे लंबा ROS1a जीन की होमोलॉजस पुनःसंयोजन-प्रोत्साहित नॉक-इन लक्षित करना, इसके अंतर्जात प्रोमोटर को GUS रिपोर्टर जीन से मिलाकर, प्राथमिक (T(0)) ट्रांसजेनिक पौधों में ROS1a को पुन: उत्पन्न रूप से बाधित करता है। ये T(0) पौधे वेजिटेटिव चरण के दौरान कोई स्पष्ट रूपात्मक रूपांकनों का प्रदर्शन नहीं करते हैं, और GUS स्टेनिंग ने परागण, निषेचित न होने वाले अंडाणुओं और मेरिस्टेमेटिक कोशिकाओं में ROS1a अभिव्यक्ति दिखाई। दिलचस्प बात यह है कि न तो मातृ और न ही पितृ नॉक-इन नल एलील, ros1a-GUS1, वास्तव में परिजनों में पाया गया; ऐसी एक अविश्वसनीय नल उत्परिवर्तन को पारंपरिक उत्परिवर्तन तकनीकों द्वारा अलग करना कठिन है जो आमतौर पर परिजनों की जनसंख्या में उत्परिवर्तकों की पहचान और पृथक्करण के लिए उपयोग की जाती हैं। यहाँ तक कि पितृ ROS1a एलील की उपस्थिति में भी, मातृ ros1a-GUS1 एलील ने प्रारंभिक अवस्था के एंडोस्पर्म विकास में विफलता को जन्म दिया, जिससे अधूरा भ्रूण विकास हुआ, जिसमें भ्रूण विकास ने असंगठित लेकिन जीवित भ्रूण उत्पन्न किए जो बीज निद्रा को पूरा नहीं कर पाए, जिससे एंडोस्पर्म विकास में ROS1a के मातृ और पितृ योगदान का असमानता प्रकट होती है। पितृ ros1a-GUS1 एलील परिजनों को प्रेषित नहीं किया गया, संभवतः निषेचन से पहले एक पुरुष गेमेटोफाइटिक दोष के कारण। इस प्रकार, ROS1a पुरुष और महिला गेमेटोफाइट्स दोनों में आवश्यक है, और DNA डीमेथिलेशन दोनों गेमेटोफाइट्स में महत्वपूर्ण भूमिकाएं निभाता है।