रेफ्रेक्टिव इंडेक्स में मिसमैच के कारण कॉन्फोकल फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोपी में विसंगतियाँ

सारांश: जैविक नमूनों के अवलोकन में उत्पन्न रेफ्रेक्टिव इंडेक्स मिसमैच का प्रभाव कॉन्फोकल फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोपी में इमेज अधिग्रहण प्रक्रिया पर सैद्धांतिक रूप से जांचा गया है। इस विश्लेषण में प्रकाश की वेक्टरिक विशेषताओं को ध्यान में रखा गया है और यह उच्च संख्यात्मक एपर्चर के लिए मान्य है। व्यवहारिक स्थितियों के लिए रिज़ॉल्यूशन में कमी, तीव्रता में गिरावट और फोकस के स्थानांतरण पर मात्रात्मक भविष्यवाणियाँ दी गई हैं। जब 1·3 (तेल डूबाने) के संख्यात्मक एपर्चर के साथ और 514 नैनोमीटर की उत्तेजना तरंगदैर्ध्य के साथ अवलोकन किया जाता है, तो फोकस का केंद्र 10 माइक्रॉन के अक्षीय विस्थापन के लिए 1·7 माइक्रोन स्थानांतरित होता है, जिससे एक छवि प्राप्त होती है जो अक्षीय दिशा में 1·2 के गुणांक द्वारा स्केल की गई है। इसके अलावा, यह अपेक्षित है कि एक फ्लोरोसेंट सतह जो 20 माइक्रॉन गहराई में है, वह एक सतह की तुलना में 40% कम पीक तीव्रता दिखाती है जो 10 माइक्रॉन गहराई में है। इसके अतिरिक्त, अक्षीय रिज़ॉल्यूशन 1·4 के गुणांक द्वारा कम किया गया है। इस सिद्धांत को विभिन्न रेफ्रेक्टिव इंडेक्स वाले परीक्षण नमूनों के लिए प्रयोगात्मक रूप से सत्यापित किया गया।