デジタルローリングサークル増幅により、6オーダーの動的範囲を持つ生存可能な食品由来病原菌の正確かつ敏感な検出

食品中の生存可能な病原菌の存在は、深刻な食中毒を引き起こす可能性があり、人間の健康にリスクをもたらします。本研究では、生存可能な食品由来病原菌の正確かつ敏感な定量を可能にするデジタルローリングサークル増幅（dRCA）アッセイを開発しました。リガーションベースのパドロックプローブを用いて病原体のRNAを直接標的にすることで、生存している細菌と死んだ細菌を正確に区別できます。dRCAの一対象一アンプライコン特性により、高感度と広範な定量検出範囲が実現され、検出限界は10 CFU/mL、動的範囲は6オーダーです。dRCAは、0.1%という低い割合でも稀な生存可能な細菌を検出でき、ライブ/デッド染色法よりも50倍敏感です。生存可能な細菌を検出するための高感度は、dRCAを滅菌効率の評価に適合させます。このアッセイに基づき、加熱殺菌の場合、温度を68 °Cにわずかに上昇させることで加熱時間を10分に短縮でき、これは高温曝露による栄養素の劣化を最小限に抑える可能性があります。このアッセイは、生存可能な病原菌による汚染を評価し、滅菌を評価するための正確なツールとして機能し、食品安全管理を促進します。