AAV5ベクターのインテグレーションプロファイルの縦断的動態とマウスにおけるクローン増殖の評価

アデノ随伴ウイルス（AAV）ベースのベクターは、遺伝子移転のために臨床で使用され、エクストラクロモソームエピソームとして存在します。ベクターゲノムのごく一部が宿主ゲノムにインテグレートしますが、腫瘍形成の理論的リスクはベクターの調節機能に依存します。重要な機能を模倣するSf細胞とHEK293細胞を使用して生成されたAAV5サブタイプベクターのインテグレーションプロファイルを調査するためにマウスモデルが使用されました。重度の血友病Aに対する遺伝子療法であるバロクトコゲンロキサパルベック（AAV5-hFVIII-SQ）の主要な特徴を模倣します。インテグレーションの95％はエピソーム由来であり、平均（±標準偏差）インテグレーション頻度は、SfおよびHEK293で生成されたベクターで1,000細胞あたりそれぞれ2.70 ± 1.26および1.79 ± 0.86でした。縦断的インテグレーション分析は、インテグレーションが主に1週間以内に、低頻度で発生し、その豊富さが時間とともに安定していることを示唆しました。インテグレーションプロファイルはポリクローンであり、ランダムに分布していました。どちらのベクター生産プラットフォームでもインテグレーションプロファイルに大きな違いは観察されず、クローン増殖と関連するインテグレーションはありませんでした。インテグレーションは、肝臓で高く発現される遺伝子の転写開始点近くに濃縮されており（p = 1 × 10−4）、低発現の遺伝子にはあまり濃縮されていませんでした。ベクターのインテグレーションによる腫瘍形成や線維症の証拠は見つかりませんでした。