マウスの一次水晶体上皮細胞培養の最適化：トリプシン処理に関する包括的ガイド

水晶体上皮細胞（LEC）は、水晶体の恒常性と正常な機能を維持する上で多くの重要な役割を果たします。LECは水晶体の成長、発達、サイズ、および透明性を決定します。一方で、機能不全のLECは白内障の形成や後嚢不透明症（PCO）を引き起こす可能性があります。したがって、白内障の発達、生化学、治療、およびPCO予防に従事している研究者にとって、強固な一次LEC培養システムの確立は重要です。しかし、一次LECの培養は、限られた入手可能性、遅い繁殖率、および脆弱な性質のため、長年にわたり課題を呈してきました。本研究では、このような障害に対処するために、一次LEC培養に関する包括的なプロトコルを提示します。このプロトコルには、最適化された培養培地の調整、レンズカプセルの正確な分離、トリプシン処理技術、サブカルチャ手順、収穫プロトコル、および保管および出荷に関するガイドラインなどの重要なステップが含まれています。培養過程全体にわたり、細胞形態は位相差顕微鏡を用いて監視されました。培養されたLECの真正性を確認するために、免疫蛍光アッセイを実施して、αA-およびγ-クリスタリンという重要な水晶体タンパク質の存在および細胞内分布を検出しました。この詳細なプロトコルは、研究者に一次LECの培養と特性評価のための貴重なリソースを提供し、水晶体生物学の理解を深め、生理活性に関連する疾患の治療戦略の開発を容易にします。