C. elegans腸における新生RNAの標識

C. elegansにおける転写調節は、ヌクレオチドアナログがキューティクルに容易に浸透しないため、新生RNAのレベルで研究することが困難であった。本研究では、解剖された腸内の新しく転写されたRNAを敏感に顕微鏡で検出することを可能にするex vivo 5-エチニルウリジン（EU）-クリック標識プロトコルを確立した。蛍光核小体マーカーを発現する虫を用いて、EUの取り込みが核質（mRNA）および核小体（rRNA）の両方で新生転写を忠実に報告し、RNAポリメラーゼの阻害によって消失することを示した。空間分析の結果、大部分の新生rRNA転写産物が腸の核小体の線維状ゾーン（FZ）に局在することが明らかになり、この区画がrRNA合成において保存された役割を担っていることが確認された。画像化応用に加えて、このワークフローは遺伝子発現アッセイに適応可能であり、C. elegansにおける新生転写の定量分析のための多用途なアプローチを提供する。この方法は、健全な腸組織における核小体の転写を直接可視化することで、発達、老化、および病気の文脈における核小体の活動がどのように調節されるかを調査する新たな機会を開く。