非自然ヌクレオチドをテンプレートスイッチオリゴヌクレオチドに組み込むことで、バックグラウンドが低減され、非常に小さなRNAサンプルからのcDNA合成が改善される

背景：テンプレートスイッチPCR（TS-PCR）法によるcDNA合成は、配列決定のための完全長cDNAを生成する最も簡単なアプローチの1つです。しかし、数十または数百の細胞から得られるような非常に小さなRNAサンプルに適用すると、このアプローチは、TSオリゴのコンカタマー化により高いバックグラウンドと低いcDNA収量を引き起こします。結果：本研究では、バックグラウンドcDNA合成を防ぐためにテンプレートスイッチオリゴで非標準的な塩基対を形成するヌクレオチド異性体の適用を説明します。このような塩基がテンプレートスイッチ（TS）オリゴの5'末端に追加されると、MMLV-RTがcDNAをTSオリゴを越えて伸長することを阻害し、したがって、重要なバックグラウンドの原因となるTSオリゴのコンカタマーの形成を減少させることによってcDNA収量を増加させます。結論：私たちの結果は、cDNA合成のためのこの新しいアプローチが、レーザーマイクロダイセクションなどのアプローチを通じて得られる数十の細胞からなる非常に小さな生物学的サンプルに、454技術を使用した全転写産物配列決定などの超高スループット技術の適用に貴重な有用性を持つことを示しています。