酵素活性のあるβ-ガラクトシダーゼセグメントを外因性タンパク質のアミノ末端断片に結合させるin vitro遺伝子融合：翻訳開始信号の検出とクローニングのための大腸菌プラスミドベクター

私たちは、翻訳制御信号および外因性由来遺伝子の5'コーディング配列の検出およびクローニングに適した一連のプラスミドベクターの構築と使用を報告します。これらのプラスミドでは、乳糖オペロンβ-ガラクトシダーゼ遺伝子であるlacZのアミノ末端端の最初の8コドンが除去され、lacZの8番目のコドンの隣にユニークなBamHI、EcoRI、SmaI（XmaI）内因性核酸分解酵素切断部位が組み込まれました。適切な調節信号および5'コーディング配列を含むデオキシリボ核酸断片をそのようなlac融合プラスミドに導入することで、β-ガラクトシダーゼ残基のカルボキシル末端セグメントと外因性デオキシリボ核酸配列によってコーディングされたアミノ末端アミノ酸を含むペプチド断片からなるハイブリッドタンパク質が生成されました。これらのハイブリッドペプチドはβ-ガラクトシダーゼの酵素活性を保持し、Lac+表現型を示しました。このようなハイブリッドタンパク質は、外因性デオキシリボ核酸断片によってコーディングされたペプチド配列を精製するためや、特定のペプチドセグメントの構造と機能に関連する研究に有用です。