ファロイジン安定化F-アクチンとのゲルソリン相互作用のキネティクス。結合および切断の速度定数

ゲルソリンのアクチンフィラメントとの相互作用のキネティクスを、F-アクチンに結合したテトラメチルローダミンイソチオシアネート標識ファロイジンとN-(1-ピレン)ヨードアセタミド標識アクチンの2つの蛍光プローブを用いて調査しました。また、ゲルソリンによるF-アクチンの切断を評価するために、ゲルソリンが切断したフィラメントに追加された単量体アクチンの重合速度を測定するアッセイを用いて分析しました。脱重合反応を最小限に抑え、キネティクス解析を簡素化するために、ファロイジン安定化アクチンフィラメントが使用されました。ゲルソリン活性はCa(2+)-活性化されるため、最大の活性を確保するために0.5 mM CaCl2の存在下で実験が行われました。ゲルソリンとF-アクチンの相互作用は、結合と切断のイベントに対応する2つの異なるキネティクス相に分けられることを示しました。ゲルソリン活性の2段階モデルを使用して、ゲルソリンがF-アクチンに対して2 x 10(7) M-1 s-1の結合速度定数で結合し、0.4-1.2 s-1の範囲で解離し、さらに0.25 s-1の一次速度定数でファロイジン安定化F-アクチンを切断することを確認しました。結合反応と切断反応の特性付けは、ゲルソリン活性およびその調節のさらなる研究を促進します。