膜タンパク質の最近接隣接分析へのアプローチ

要約 人間の赤血球膜を単離した実験において、タンパク質成分間のクロスリンクは、o-フェナントロリン銅イオン複合体による内因性チオール基の触媒酸化および二メチルジチオビスプロピオニミデートとの反応によって生成された。これは二つの反応性基の間にジスルフィド結合を含むビスアルキルイミデートである。分子種の混合物は、二次元ジェル電気泳動手法により分析され、クロスリンクは二次元分離の初期段階で還元的切断によって分割される。クロスリンク複合体は、最終パターンの非対角要素の位置によって認識される。質量が同じペプチドの安定オリゴマーから派生したと思われる複合体が、標準の十二水酸酸ナトリウムジェルパターンの多くのバンドに対応して見つかった。異なる分子量のペプチドから形成されたヘテロ複合体はいくつかの例で暫定的に同定されたが、単一のバンドからのオリゴマーよりも少ない。さらに、クロスリンクはスペクトリンの非常に高い分子量複合体と膜の多くの低分子量タンパク質成分を生成する。観察されたクロスリンクパターンは、膜下ネットワークにアンカーされた膜貫通成分と細胞質表面成分の図と一致している。これらの膜透過性試薬で処理された壊れたゴーストと完全な細胞のクロスリンクパターンは、後者にヘモグロビン複合体が追加されることを除いてほぼ同一である。