サーモス・アクアティクスDNAポリメラーゼによるDNA合成の忠実性

我々は、熱水性バクテリアであるサーモス・アクアティクス由来のDNAポリメラーゼによって高温で触媒されたin vitro DNA合成の忠実性を決定した。3'-OH末端ミスマッチを含むDNA基質を使用して、精製されたポリメラーゼが検出可能なエクソヌクレオリティック校正活性を欠いていることを示した。Taqポリメラーゼの忠実性は、M13mp2 DNA中のlacZα補完遺伝子のin vitro DNA合成中に生成されたエラーをスコアする2つのアッセイによって測定された。どちらのアッセイにおいても、Taqポリメラーゼは9000塩基鎖ごとに1の割合で単塩基置換エラーを生成する。フレームシフトエラーも生成され、頻度は1/41,000である。これらの結果は、忠実性に対する高温の影響と、ポリメラーゼ連鎖反応によるDNAのin vitro増幅の試薬としてのTaq DNAポリメラーゼの使用に関連して考察されている。