そのアンチセンスオリゴヌクレオチドとアンチセンスRNAによる結合組織成長因子の内因性発現の抑制は血管内皮細胞の増殖および移動を抑制する

以前、私たちは、ヒト軟骨肉腫由来の軟骨細胞株（HCS-2/8）から差異表示PCRにより、主に肥大軟骨細胞で発現するmRNAをクローニングしました。これは結合組織成長因子（CTGF）と同一です。本研究では、軟骨の肥大ゾーンへの血管新生は内軟骨骨化の最終段階で発生するため、血管内皮細胞の増殖および移動におけるCTGFの役割を、そのアンチセンスオリゴヌクレオチドおよびアンチセンスRNAを用いて調査しました。免疫組織化学および免疫蛍光技術により、肥大軟骨細胞だけでなく、マウスの肋骨の肋軟骨接合部における内皮細胞も、in vivoで抗CTGF抗体で染色されたことが明らかになりました。ノーザンブロット解析では、CTGFは軟骨細胞および培養中のウシ大動脈内皮（BAE）細胞で強く発現しているが、骨芽細胞など他の細胞タイプでは発現していないことが明らかになりました。BAE細胞におけるその発現は、接着期よりも成長期の方が大きかったです。BAE細胞の接着培養の1/2が剥がされたとき、空いている領域に増殖して延びている細胞のみが抗CTGF抗体で染色されました。アンチセンスオリゴヌクレオチドの添加は、BAE細胞の増殖および空いている領域への延伸を抑制しました。また、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、急速に増殖している段階ではBAE細胞の増殖も抑制しました。ボイデンチャンバーアッセイでは、アンチセンスオリゴヌクレオチドによる前処理がBAE細胞の移動を著しく抑制しました。さらに、CTGF cDNAのアンチセンスRNAを生成する発現ベクターで安定的にトランスフェクトされたBAE細胞の増殖および移動能力は、コントロールのそれよりも著しく低かったです。これらの結果は、内因性CTGF発現がBAE細胞の増殖および移動に関与していることを示唆しています。