2.5キロベースのプロコラーゲンクローンの構築と特性評価。

組換え細菌プラスミドは、HindIII部位を持つ化学合成デカヌクレオチドにリンクされた二本鎖鶏プロコラーゲンcDNA配列をpBR322のHindIII部位に挿入することによって構築されました。Escherichia coli chi1776を形質転換した後、アンピシリン耐性によってコロニーが選択され、プロコラーゲン配列を含む組換え体は32P標識プロコラーゲンcDNAへのコロニーハイブリダイゼーションによって同定されました。3つの組換えプラスミド(pCg10、pCg13、pCg45)の挿入配列はそれぞれ1200、2200、2550塩基対の長さでした。その配列相同性は、制限酵素マッピングとニック変換プラスミドのクロスハイブリダイゼーションを用いて確立されました。pCg45は、部分的にその末端のDNA配列を決定することによってプロアルファ2コラーゲン配列を含むことが正確に確認されました：一端には短いチミンリッチ配列があり、もう一端には鶏アルファ2鎖の残基478-499をコードする配列があります。