流動細胞計測および画像に基づく外因性物質隔離マクロファージの機能的研究のための遠赤外線蛍光プローブ

クロファジン（CFZ）は、光学的に活性で赤色の化学療法薬であり、ハンセン病の治療のためにFDAに承認されており、世界保健機関の必須医薬品リストに掲載されています。興味深いことに、CFZはマクロファージに大量に蓄積し、動物や人間で薬を経口投与した後に結晶様の薬物包含物（CLDI）を形成します。定在組織マクロファージによって形成されたCLDIの蛍光スペクトルの分析により、CFZはCLDIとして蓄積されると、可溶型およびフリーベースの結晶形に対して蛍光励起（Ex：540-570から560-600 nm）および放出（Em：560-580から640-700 nm）の信号に赤方偏移を示すことが明らかになりました。エピ蛍光顕微鏡を使用して、CLDI(+)細胞はCLDI(-)細胞に対して励起640 nmおよび放出670 nmでの平均蛍光信号の>3倍の増加に基づいて特定できます。同様に、フローサイトメトリーを使用して、励起レーザー640 nmおよび放出検出器>600 nmを用いて平均蛍光信号の>100倍の増加に基づいてCLDI(+)細胞を特定できました。CLDIの蛍光励起および放出は、プロピジウムヨウ化物や4,6-ジアミジノ-2-フェニルインドール塩酸塩（DAPI）などの細胞生存染料、ホエスト33342（核）やFM 1-43（細胞膜）などの細胞染色染料、ならびに免疫表現型分析に使用される多くの他の蛍光標識抗体とは直交していました。生体内では、腹腔浸出液中のCLDI(+)細胞の>85％がF4/80(+)マクロファージであり、肺胞浸出液中のCLDI(+)細胞の>97％がCD11c(+)でした。最も重要なことに、CLDIの存在は細胞の生存率に最小限の影響を与えました。したがって、これらの結果は、CLDIにおけるCFZ蛍光が外因性物質隔離マクロファージの定量的フローサイトメトリー表現型分析および機能研究に適していることを確立します。