無害な支持体に電気泳動で分離し転送されたタンパク質の再現性のある高収率シーケンシング

ナトリウムドデシル硫酸塩-ポリアクリルアミドゲル電気泳動および電気泳動転送によって準備されたサンプルから、60-85%の初期シーケンシング収率を一貫して得ることを可能にする方法について詳細に説明されています。pHを中性に近い値で電気泳動を行うことが、以前の手法で行った変更点の中で最も重要ですが、グルタチオンまたはナトリウムチオグリコール酸の存在下での前電気泳動およびImmobilonポリビニリデンフルオリド膜の使用もこの技術の成功に寄与しています。トリプトファンがタンパク質のNH2末端である場合、前電気泳動が行われない場合に回収されたフェニルチオヒダントイン（PTH）誘導体は不可逆的な酸化生成物のように見えました。前電気泳動を行った後、回収されたPTH誘導体は修飾されていないトリプトファンのそれと共に移動し、回収率は高くなりました。メチオニンのPTH誘導体としての回収は前電気泳動によって影響を受けなかったため、サンプル分離中の電気泳動バッファ中のチオグリコール酸がメチオニン硫黄の酸化を防止または逆転させたことを示唆していますが、トリプトファンは保護されませんでした。