ヒトコロニー刺激因子-1受容体によるホスファチジルイノシトール-3キナーゼ活性の変異解析

コロニー刺激因子-1（CSF1）は、マクロファージおよびその前駆細胞の成長、分化、生存に必要な細胞系特異的ヘモポエチンです。ヒトCSF1受容体（CSF1R）は150 kDaの膜貫通糖タンパク質で、その細胞質チロシンキナーゼドメインは約70アミノ酸のキナーゼ挿入（KI）領域によって分割されています。私たちは、CSF1R KIドメイン欠失変異体が、チロシンキナーゼ癌遺伝子および受容体チロシンキナーゼによって活性が増強される酵素であるホスファチジルイノシトール-3キナーゼ（PtdIns-3-キナーゼ）を刺激し、転送細胞におけるミトジェネシスを支持する能力を試験しました。CSF1刺激細胞からの受容体免疫沈降物は、非刺激細胞と比較して5倍以上のPtdIns-3-キナーゼ活性を含んでいました。薄層クロマトグラフィー板から削り取ったPtdIns-3-キナーゼ産物の高速液体クロマトグラフィー分析は、PtdIns-3-Pが生成されたことを示しました。CSF1R KIドメイン欠失変異体は、in vitroでチロシンキナーゼ活性を保持していました。CSF1Rの重複する28および30アミノ酸のKI欠失変異体の受容体免疫沈降物は、一方でKIドメインの67アミノ酸を欠くCSF1Rの免疫沈降物とは対照的に、いくつかのPtdIns-3-キナーゼ活性を保持していました。各欠失変異体は、野生型受容体を発現する細胞と比較して、転送された細胞におけるCSF1依存性DNA合成をかなり低いレベルで刺激しました。これらのデータは、PtdIns-3-キナーゼとの結合におけるCSF1R KIドメインの役割と、DNAへのチミジン取り込みにおけるCSF1の誘導を示唆しています。