RasとRaf間の重要な結合および調節相互作用は、Rafの小さく安定したN末端ドメインと特定のRasエフェクタ残基を介して生じる。

遺伝子および生化学的証拠は、Ras原癌遺伝子産物がRafキナーゼ経路の活性化を調節することを示唆しており、これによりRafが活性化されたRasの直接的な細胞増殖エフェクタであるという提案がなされる。ここでは、c-Raf-1調節領域のRas-GTP、Ras-GDP、および10の癌遺伝子およびエフェクタ変異Rasタンパク質に対する相対的親和性をインビトロで測定するための新しい競争アッセイの使用を報告する。c-Raf-1は、正常なRasおよび癌のV12およびL61形態のRasと同等の親和性で結合する。中程度に形質転換する変異体RasE30K31も、c-Raf-1調節領域に通常の親和性で結合した。形質転換に欠陥のあるRasエフェクタ変異体RasN33、RasS35、およびRasN38は結合が悪かった。対照的に、形質転換に欠陥のあるRasG26I27およびRasE45変異体はc-Raf-1調節領域にほぼ野生型親和性で結合した。c-Raf-1の安定した高親和性Ras結合領域は、最初の257残基の99アミノ酸サブフラグメントにマッピングされた。識別された最小のRas結合領域はN末端残基51から131で構成されていたが、領域の安定した発現と高親和性結合は、残基132から149の存在によって改善された。Raf亜鉛フィンガー領域の削除はRas結合親和性を減少させなかったが、最初の50アミノ酸の除去は親和性を大幅に向上させた。Raf1-149のセリン43に対するプロテインキナーゼAによるリン酸化はRas結合の有意な抑制をもたらし、環状AMPのダウンレギュレーションメカニズムがこの小さなRas結合ドメインでのみ発生する構造変化によるものであることを示している。